原理:麥胚凝集素(WGA)是從谷物中提取出來,可以特異性的結合心肌細胞膜上的一種糖蛋白,二者結合起來可以將心肌細胞膜染出來。WGA 可以把心肌細胞膜染出來,這樣是否肥大的細胞從圖像與正常組的對比就可以看出,也可以用專門的軟件對染出的細胞進行直徑、面積等的測量,能夠分析心肌細胞是否肥大。
試劑盒組成:
iFluor 488-WGA 染色液(即用型)
抗熒光淬滅封片劑(干固型)
DAPI(即用型)
使用方法:
1、樣本準備:
1)石蠟切片:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ。取出放在通風廚內,酒精晾干后放入自來水中稍洗,蒸餾水洗。
2)冰凍切片:取出低溫冷凍的冰凍切片復溫后,切片浸沒于固定液中固定 10-30min,PBS 洗5min 重復 3 次。
3)細胞爬片(固定):培養(yǎng)好的去掉培養(yǎng)液,PBS 清洗 3 次,在細胞爬片上滴加固定液固定 10- 30min,PBS 洗 5min 重復 3 次。
2、抗原修復:組織切片置于盛滿 PH 9.0 EDTA 堿性抗原修復液或者 PH6.0 檸檬酸修復緩沖液的修復盒中于微波爐內進行抗原修復。自然冷卻后將玻片置于 PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次,每次 5min。(新鮮組織冰凍切片和細胞爬片省略此步驟)。
3、WGA 染色:組化防水筆畫圈,然后滴加 iFluor 488-WGA 染色液于 37 度染色避光孵育 30min-2h(濕盒內放少量水),PBS 洗 5min 重復 3 次。
4、DAPI 復染細胞核:滴加 DAPI 即用型染液,避光室溫孵育 5min-20min,PBS 洗 5min 重復 3 次。
5、封片:玻片滴加適量抗熒光淬滅封片劑,輕輕的從一側蓋下蓋玻片(建議使用本試劑盒內抗熒光淬滅封片劑 ,封片過程應避免氣泡)。
6、鏡檢拍照:切片于熒光顯微鏡/共聚焦/多通道熒光掃描儀/多光譜成像系統(tǒng)下觀察并采集圖像。
結果:Dapi 復染細胞核呈藍色;iFluor 488-WGA 標記陽性呈綠色
注意事項:
1、WGA 染料存在淬滅的可能,建議試用本試劑盒內的抗熒光淬滅封片劑,并盡快成像。
2、對于活細胞染色,可不用固定,用 PBS 清洗掉培養(yǎng)液后,加入 WGA 染料 37 度避光 10-30min。
3、固定后的樣本(如石蠟切片),須經過高溫修復否則會造成染色陽性結果偏弱。
4、對于細胞樣本,染色前避免使用通透液,否則會造成細胞內(如高爾基體和內質網)結構的染色。
5、WGA 染料建議分裝后-20 度保存,盡量避免反復凍融。





